跃进对于单克隆抗体传播阻断优化

    筛选出受精前后均有表达的 PbPH 作 为研究对象。因此，本研究制备了抗 PbPH 单 克隆抗体，通过 WB 和 IFA 检测 PbPH 的表达阶 段和抗 PbPH 单克隆抗体的特异性，并通过体外配子体出丝和动合子形成实验检测抗 PbPH 单克 隆抗体的传播阻断效果。移液器 ( QZ07508，Thermo 公司) ; 垂直电泳槽 ( EPM-7552，上海天能科技 有限公司) ; 电转槽 ( Bio-Pad，美国) ; 分析天 平 ( L-1660DTP，日本 Shimadzu) ; 电热恒温培 养箱 ( HH-B11-420，上海跃进医疗器械厂) ; OLYMPUS 显微镜及成像 系 统 ( BX53， 日 本 OLYMPUS公司) ; 涡旋振荡器 ( VOＲTEX-5，海 门其林贝仪器制造有限公司) 。

    为确定抗 PbPH 单克隆抗体是否影响动合子形成，将苯肼处理过 的雌性 BALB /c 小鼠经尾静脉注射 1 × 106 个 P． berghei感染的红细胞，感染后第 3 天，取 10 μL 感染小鼠的尾血与 90 μL 动合子培养基稀释 的抗 PbPH 单克隆抗体/PBS ( 以 15、110、 150) 混合，19 ℃培养 24 h，固定培养物，以 抗-Pbs21 单克隆抗体 ( 1500) 标记，荧光显微镜下计数动合子形成数。采用 SPSS 23. 0 软件进行 t 检 验的统计学分析，P ＜0. 05 具有统计学意义。为了确定抗 PbPH 单克隆抗体是否识别伯氏 疟原虫蛋白，对纯化后的裂殖体、配子体和动合 子的裂解物进行 Western blot ( WB) 分析。抗 PbPH 单克隆抗体主要识别配子体和动合子，条 带大小约 33 kDa，与预测的蛋白大小一致，在裂 殖体抗原中未检测到相应条带。这与本 教研室之前的研究结果相符合，证实了抗 PbPH 单克隆抗体可以识别疟原虫配子体和动合子。